PCR實驗室又被稱爲遺傳基因擴增實驗室,特點是能把少量的DNA大幅上升,PCR是生物學研究與實驗的基本方式,廣泛用于分子生物學各行各業。比如:hlv、乙肝、禽病疫、癌基因的檢查和確診,DNA指紋、個體識別、dna鑒定及法醫物證、動植物檢疫,小動物以及衍生品檢驗,飼料原料、護膚品、食品類衛生檢測,轉基因作物與轉基因食品微生物檢驗等。
本文從PCR實驗室合理布局、工作中區域的重要功能和設備配置、實驗室的排風系統及壓力控制、裝飾裝修材料規定及其它常見問題來講解。
一、PCR實驗室合理布局
正常情況下分成四個區域:試劑提前准備區、試品制備區、擴增區和擴增物質分析區。
PCR實驗室正常情況下爲試劑提前准備區、試品制備區、擴增區和擴增物質分析區四個獨立的工作中區域並配有專用型過道,各工作中區域需設緩沖間,工作區域與緩沖間宜組裝連鎖加盟設備。不一樣的功能工作區域應該是隔開獨立,各工作區域有明顯標示,不可以直達,假如緊密結合,需組裝物件傳遞窗。
PCR實驗室區域設置並不是一成不變的,以下這些狀況必須表明:
1.假如樣版在擴增前需要破碎解決,就需要增加一個區域用以樣品破碎。
2.如果使用實時熒光PCR法,則擴增區和分析區能夠合並爲一個區。
3.如果使用全自動PCR檢測儀,則樣本制備區、擴增區和分析區能夠合並爲一個區。
前兩區爲擴增後區,後兩區爲擴增後區,擴增後區與擴增後區應嚴苛分離。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清理材料及,需要從擴增後區流入擴增後區,也就是從試劑提前准備區、試品制備區到擴增區和擴增物質分析區,不可反向流動性。實驗室的氣旋也應從擴增後區流入擴增後區,不可反向流動性。各工作區域頂端應組裝紫外線燈,紫外線燈的光波長爲254nm,每20㎡一支40W的紫外線燈。
二、實驗室各個區作用及關鍵設備
正常情況下的四大區域留意正壓力負壓力的控制。
1.試劑提前准備區:
關鍵開展試劑的制備、分開包裝和主反應混合物的制備。試劑和用以試品制作出來的原材料應立即運輸至該區域,不可通過其他區域。試劑原料務必存儲在本區內,並且在本區內制備成所需要的試劑。本區關鍵設備有天平秤、電冰箱、離心脫水機、加樣器、震蕩器等。
針對氣旋的壓力操縱,本區並沒高的要求。
2.試品制備區:
关键开展样品储存、核苷酸(RNA、DNA)获取、存储以及添加至扩增反应管和检测DNA的生成。本区关键设备有电冰箱、超淨工作台、离心脱水机、加样器、震荡器、恒温水浴槽等。
本區的滲透壓力要求爲:相較于相鄰區域爲正壓力,以防止從相鄰區進到本區的大氣氣溶膠環境汙染。
3.擴增區:
该区域功能的是DNA扩增和扩增精彩片段的测量。除此之外,反映混合物(来源于试剂存储和制备区)制备成反映混合物和已制备的DNA模版(来源于样本制备区)的加持等还可在本区中进行。针对气旋的压力操纵,相较于相邻区域为负压力,以防止大气气溶胶从本区漏出来。为防止大气气溶胶所引起的环境污染,应尽量避免在本区内不必要行走。某些实际操作亦或者样等需在超淨工作台中进行。
该区域的机器通常是核苷酸扩增热力循环仪、加样器、超淨工作台等。在其中热力循环仪的开关电源应专用型,并配置一个可调稳压电源或UPS,以避免因为工作电压的变化对扩增测量影响的关键开展DNA扩增。
本區的滲透壓力要求爲:相較于相鄰區域爲負壓力,以防止大氣氣溶膠從本區漏出來。
4.擴增物質分析區:
擴增産物的測量。本區關鍵設備有酶標儀、洗板機、加樣器和沙浴箱等。
本區的壓力差的要求爲:相較于相鄰區域爲負壓力,以防止擴增物質從本區蔓延至其他區域。
三、PCR實驗室排風系統及壓力控制
四大區域應産生單邊流線型、應采用全送全排。
各區域中間需具備單邊的試驗加工工藝流、貨運物流、人流量與氣旋,産生單邊步驟保護的天然屏障,防止試驗間的互相影響,避免大氣氣溶膠蔓延對實驗步驟導致環境汙染。
PCR實驗室並沒嚴格淨化處理規定,可是爲防止每個試驗區域交叉汙染的概率,應采用全送全排的自然通風方式,嚴格把控送、排風系統比例以確保各試驗區工作壓力規定。
此外,PCR实验室内一般有超淨工作台、通风橱等生产线设备,这种机器设备风量大而使用时长有间隔性,并不和空调机组使用时间一致,这就使得有这些机器设备房间在设备起停的时候特别非常容易过压,本来正常渗透压力一下子就破坏。这便是PCR实验室空调机组定制的难题所属。
四、PCR實驗室裝修设计
原材料規定:實驗室排架結構應堅固、密封性好。全部陽角線應采用弧形銜接,牆面內腔光滑、不積灰、抗腐蝕、易清潔消毒。路面應用PVC卷材或環氧樹脂膠自流坪,原材料應達到無間隙、沒有滲漏、光滑、抗腐蝕的需求。
五、PCR實驗室常見問題
試品制備區室內空間會大些:
1.好多个区域大小设定状况,试剂提前准备区、扩增区、扩增物质分析区,室内空间能够相对性小一些,试品制备区域置放超淨工作台和低温箱,室内空间应大一些。
2.試劑提前准備區、試品制備區設緊急洗眼器,以確保作業人員的安全性。
3.PCR實驗室並沒有嚴格淨化處理規定,也可以根據應用情況和資金投入挑選。